Тест на Альфа – ПВП

Альфа – ПВП обладает высокой липофильностью и интенсивно биотрансформируется в организме. Инструментальные химико – токсикологические тесты считаются самыми достоверными, поскольку определяют маркеры синтетического наркотика независимо от скорости метаболизма и других индивидуальных факторов.

Виды химико – токсикологических тестов

Новые «дизайнерские» наркотики являются самыми мощными избирательными ингибиторами обратного захвата норадреналина и дофамина, без обратного процесса высвобождения.

Альфа-пирролидинопентиофенон состоит из хиральных молекул, в которые включены эндомеры. Центр в хиральном атоме связан с пирролидином. Гетероциклический атом азота отвечает за основные свойства синтетических соединений. Альфа – ПВП изолируются в биологическом материале при условии щелочных значений pH.

Инструментальные методы исследования биологических жидкостей на наличие метаболитов синтетических наркотиков, считаются самыми достоверными. Поскольку в образцах определяются несколько метаболитов Альфа – ПВП, что позволяет установить факт наркомании независимо от скорости метаболизма или прошедшего периода употребления. При употреблении Альфа-пирролидинопентиофенона происходит минорное гидроксилирование по фенольному кольцу.

Положительный иммунохимический анализ (экспресс – тест) на наркотики считается предварительным результатом – первая стадия химико – токсикологического исследования. Но отрицательный результат имеет доказательное значение.

Отрицательный результат, получаемый на первой стадии, имеет важное значение в тактике диагностического исследования, т.к. дальнейшие анализы не выполняются и дается заключение об отсутствии контролируемых веществ в пробе, что свидетельствует об отсутствии факта потребления наркотического средства, психотропного или другого токсического вещества. Однако необходимо отметить, при наличии клинической картины опьянения у обследуемого лица и отрицательном результате ИХА исследования продолжают.

Диагностика потребления наркотических средств, психотропных и других токсических веществ методами иммунохроматографического анализа и высокоэффективной жидкостной хроматографии - тандемной массспектрометрии с линейной ионной ловушкой /Б. Н. Изотов, А. Г. Кочетов/ - Методические указания. – М. 2016. – 8 с.

Вторая подтверждающая стадия исследований – диагностика образцов одним из инструментальных методов. Основные метаболиты Альфа – ПВП выводятся из организма с мочой в виде глюкоронидов и сульфатов, остальные соединения полностью совпадают с другими синтетическими катинонами.

В процессе биотрансформации α – PVP происходит окисление пирролидинового кольца и деалкилирование метилендиокси-фрагмента, с последующим метилированием.

Сравнительная характеристика химико – токсикологических методов анализа на обнаружение метаболитов Альфа – ПВП в биологических жидкостях:

Иммунохимический анализ		Хроматографический анализ
Плюсы	Минусы	Плюсы	Минусы
Высокая чувствительность	Возможность получения ложноположительного результата (перекрестные вещества)	Высокая чувствительность и специфичность	Длительность исследования
Объективность оценки	Не определяет индивидуальное химическое соединение внутри группы	Определение количества употребленного вещества	Для объективной интерпретации результатов требуется высокая квалификация персонала
Быстрота анализа	-	Идентификация химического соединения внутри группы	-
Простота выполнения	-	-	-
Умеренная цена теста	-	-	-
Минимальный объем тестируемого образца	-	-	-

Второй этап исследований превышает по чувствительности и специфичности предварительное тестирование. Это позволяет исключить возможность получения ложноположительного результата.

Экспресс – тест

Иммунохроматографический тест – полоски распознают метаболиты Альфа – ПВП в слюне или моче. Скрининговые экспресс – тесты, как альтернатива высокотехнологичного лабораторного исследования подходят для диагностики в домашних условиях. Достоверность иммунохроматографического теста позволяет контролировать ремиссию у наркоманов.

Отсутствие предварительной подготовки образцов и быстрота диагностики – главные преимущества метода. Небольшое количество слюны или мочи позволяет провести диагностику при подозрении на наркотическое опьянение у любого лица.

За быстротой диагностики каждого экспресс – теста стоит трудоемкий и высокотехнологичный процесс разработки. Принцип диагностики иммунохроматографических тестов выстроен на основе метаболических превращений и последующей реакции антиген – антитело.

После метаболических трансформаций α – PVP распадается на химические соединения, которые вступают в реакцию с компонентом на ИХА – полоске. Для диагностики необходим один вид биоматериала: слюна или моча. Производитель всегда указывает на упаковке, какой материал необходим в качестве образца.

Чаще для экспресс - диагностики используют мочу, поскольку в слюне концентрация метаболитов значительно ниже. Тест констатирует факт употребления, количество употребленного наркотика установить невозможно.

Виды ИХА – тестов:

• Гигроскопические полоски с тестовой зоной – впитывающая мембрана поглощает жидкость, после чего происходит реакция по типу лакмусовой бумажки. Присутствие в моче или слюне синтетических метаболитов приводит к окрашиванию конъюгата;
• ИХА полоска в пластиковом корпусе с двумя окнами (приемное и тестовое) – кассетные тесты чаще используются для диагностики слюны. Необходимо несколько капель биообразца. Принцип скрининга аналогичен.

ИХА основан на принципе тонкослойной хроматографии и специфической реакции антиген-антитело. Антитела (иммуноглобулины) являются относительно крупными (~150 кДа – IgG) гликопротеинами, продуцируемые В-лимфоцитами (плазматическими клетками) и имеющими сложное строение. Антитела распознают не отдельные химические группы, а пространственную форму антигенов.

Гребенкина Е. В. Разработка методик химико – токсикологического исследования синтетических наркотиков / Е. В. Гребенкина/ - М. 2019. – 17 - 39 с.

Контрольная полоска на ИХА – тесте содержит антитела распознающие метаболиты Альфа – пирролидинопентиофенона со специфичным аминокислотным строением полипептидной цепи. В мультипанелях иногда возникают перекрестные реакции (общие эпиотипы наркотика), поэтому возможен ложноположительный результат.

Для выявления метаболитов «дизайнерского» наркотика применяется метод конкурентного ИХА – ковалентная связь аналита с белком носителем в небольших молекулах. Слюна или моча содержащие метаболиты наркотика продвигаются по мембране тестовой полосы за счет капиллярных сил. После прохождения стартовой полосы (Т) биологическая жидкость вступает с нанесенным в реакцию с конъюгантом и образуется иммунокомплекс (антиген – антитело). Далее, жидкость проходит через тестовую полосу (К).

Алгоритм сбора материала для исследования методом ИХА

К каждому тесту прилагается контейнер или пипетка. Процесс диагностики занимает 5 – 10 минут.

Алгоритм проведения экспресс теста:

• Собрать мочу или слюну в чистую пластиковую емкость.
• Извлечь погружную тест – полоску из герметичного пакета и опустить в емкость до контрольной отметки на несколько секунд.
• Оценить результат согласно инструкции.

В зависимости от нанесенного реагента в зоне контроля появляется окрашенная полоса (розовая, бурая), что свидетельствует о правильном выполнении тестирования.

Если концентрация метаболитов ниже порогового уровня или полностью отсутствует, то тестовая зона окрашивается аналогично контрольной.

Две окрашенные полосы на тест – полоске свидетельствуют об отрицательном результате. Появление одной полосы в тестовой зоне, свидетельствует о наличии метаболитов Альфа – ПВП.

Для определения альфа-ПВП в моче или слюне панельным (планшетным) тестом, образец набирают в пипетку. В тестовое окошко необходимо нанести 3 капли, через 5 минут проводят оценку результата согласно инструкции.

Бренды и производители:

• Наркоскрин – компания ИнТек Продактс (Китай). Мультипанель для определения метаболитов наркотика в слюне;
• Абусетест (Drug Abuse Test Kit a-PVP) – компания ЛИМИТЕД (Китай). Тест – панель для определения метаболитов в моче;
• Наркочек – компания АйЭнДи Диагностик (Канада). Погружные тест – полоски;
• ИХА-3-Мульти-фактор, ИХА-5-Мульти-фактор, ИХА-6-Мульти-фактор – компания Фактор – Мед (Россия) – погружные тест – полоски.

Небольшое изменение химической формулы Альфа – ПВП в теневых лабораториях, часто приводит к отрицательным тестам методом ИХА. Производители ИХА тестов стараются отслеживать новые «соли» и дополнять панели новыми антителами.

Хромато-масс-спектрометрия

Инструментальные методы диагностики позволяют провести дифференцирование метаболитов в биологических жидкостях.

Газовая хроматография прочно заняла ведущее место среди наиболее эффективных методов анализа и широко применяется в судебно – химических и химико – токсикологических лабораториях.

Обнаружение α – PVP и его метаболитов в биологических образцах методом газовой хроматографии / масс – спектрометрии / Э. Г. Николаева, М. В. Марченко, И. Б. Бантыш, Н. А. Крупина/ - ГБУЗ МО «Бюро СМЕ» МЗ МО. – Журнал СУДЕБНАЯ МЕДИЦИНА. - том 1 № 2. – 2015. – 79 -80 с.

Для обнаружения метаболитов наркотика применяют комбинированный метод исследования – капиллярная газовая хроматография и масс – спектрометрия. Сочетание методик позволяет повысить чувствительность детектирования и идентифицировать каждый компонент.

Газовая хроматография позволяет выявить метаболиты не только в биологических жидкостях, но также и в твердофазных образцах (волосы, ногти).

Параметры для идентификации метаболитов α – PVP:

• Временной интервал хроматографического удерживания.
• Масс – спектр.

Разрушение пирролидинового кольца до первичного амина – общий метаболический процесс для Альфа – пирролидинофенонов.

Метаболизм Альфа – ПВП в биологических жидкостях происходит намного быстрее, в отличие от волос. Постепенная аккумуляция токсинов в волосах позволяет при помощи химико – токсикологического исследования определить «стаж» наркомании.

Для анализа берут от 15 до 50 образцов волос с любой части тела и отдельно с головы (не менее 100). Образцы срезаются как можно ближе к корням, после чего помещаются в пробирку с органическим растворителем. Происходит растворение белковых стволов волос и выход накопленных токсинов. Полученный раствор анализируется в газовом хроматографе.

Преимущества химико – токсикологического исследования волос на метаболиты Альфа – ПВП:

• определение единичного или хронического употребления;
• высокая достоверность результатов;
• выявление конкретного представителя группы синтетических катинонов;
• доступность образцов.

Метод газовой хроматографии для химико – токсикологического исследования биологических жидкостей (кровь, слюна, моча) относится к первому этапу – определение метаболитов I фазы.

Для определения метаболитов I и II фазы проводят подтверждающий анализ методом жидкостной хроматографии с масс – селективным детектированием.

Для идентификации метаболитов фазы I необходимо обязательное проведение гидролиза, что значительно увеличивает длительность анализа и последующий анализ методами газовой и жидкостной хроматографии с масс – спектрометрическим детектированием. Однако определение метаболитов фазы II вследствие значительной молекулярной массы и малой термостабильности возможно только при использовании ЖХ – МС/ МС.

Структура и лабораторная диагностика немедицинского потребления современных синтетических наркотических средств /О. Л. Балабанова, В. В. Шилов, А. Н. Лодягин, С. И. Глушков/ - журнал им. Н. В. Склифосовского Неотложная медицинская помощь. – 2019. – 315 – 318 с.

Параметры для идентификации метаболитов Альфа – ПВП методом ВЭЖХ – МС/МС:

• Временной интервал (выход вещества из колонки).
• Выделение исходного иона и его регистрация.
• Масс – спектр ионов.

Для скрининга применяется селективный анализ с минимальными объемами образцов (1 мл). Прибор оснащен линейной ионной ловушкой, которая регистрирует полный масс – спектр.

Масс – спектромер идентифицирует более 600 различных веществ и 4000 соединений. База данных содержит все новые психоактивные вещества для идентифицирования метаболитов в биологических жидкостях.

Можно ли обмануть тест

Обмануть тест на наркотики невозможно, если не было фальсификации или порчи био – образца. Экспресс – тесты могут показывать отрицательный результат, только если компоненты психотропного вещества неизвестны. В остальных случаях диагностика (ИХА или инструментальный метод исследования) биологических жидкостей всегда показывает наличие метаболитов Альфа – ПВП.

«Соль» имеет разный период выведения из организма. Но ее свойство к аккумуляции в тканях даже после однократного приема, позволяет обнаружить токсичные соединения в любом биологическом материале.

Заключение

• Химико – токсикологические тесты на наличие метаболитов Альфа – ПВП проводят в несколько этапов, что значительно повышает достоверность результатов.
• Экспресс – тесты устанавливают только факт приема запрещенных веществ.
• Инструментальные методы исследования самые точные, поскольку происходит дифференцирование синтетических метаболитов.
• Химико – токсикологическое исследование волос позволяет установить точный «стаж» наркомании.
• Обмануть тест на наркотики невозможно.

1. Гребенкина Е. В. Разработка методик химико – токсикологического исследования синтетических наркотиков / Е. В. Гребенкина/ - М. 2019. – 17 - 39 с.
2. Диагностика потребления наркотических средств, психотропных и других токсических веществ методами иммунохроматографического анализа и высокоэффективной жидкостной хроматографии - тандемной массспектрометрии с линейной ионной ловушкой /Б. Н. Изотов, А. Г. Кочетов/ - Методические указания. – М. 2016. – 8 с.
3. Структура и лабораторная диагностика немедицинского потребления современных синтетических наркотических средств /О. Л. Балабанова, В. В. Шилов, А. Н. Лодягин, С. И. Глушков/ - журнал им. Н. В. Склифосовского Неотложная медицинская помощь. – 2019. – 315 – 318 с.
4. Обнаружение α – PVP и его метаболитов в биологических образцах методом газовой хроматографии / масс – спектрометрии / Э. Г. Николаева, М. В. Марченко, И. Б. Бантыш, Н. А. Крупина/ - ГБУЗ МО «Бюро СМЕ» МЗ МО. – Журнал СУДЕБНАЯ МЕДИЦИНА. - том 1 № 2. – 2015. – 79 -80 с.
5. Крупина Н. А. Мониторинг случаев обнаружения α – пирролидиновалерофенона и его метаболитов / Н. А. Крупина/ - Журнал СУДЕБНАЯ МЕДИЦИНА. – том 2 № 2. – 2016. 107 – 108 с.